تولید پروتئین نوترکیب Tax ویروس HTLV 1 در سویه باکتریایی Rosetta DE3

زمینه و اهداف:HTLV1 اولین رتروویروس انسانی شناخته شده است که در انسان تولید بیماری میکند. عمده فیزیوپاتولوژی بیماری های مربوط به HTLV1 به خصوصیات پروتین Tax این ویروس مربوط می شود. استفاده از گونه های جهش یافته پروتین Tax در کنار دارو های تنظیم کننده سیستم ایمنی می تواند به عنوان تعدیل کننده پاسخ های ایمنی قوی در طراحی واکسن بکار گرفته شود. این پاسخ های ایمنی مضر،باعث بیماری HAM-TSP میشود و تعدیل انها راه امیدی را برای درمان بیماران در پیش رو قرار می دهد. به این علت تولید پروتئین نوترکیب Tax هدف این مطالعه قرار گرفت. روش بررسی: توالی کد کننده پروتئین Tax (حاوی جهش R222K) موجوددر وکتور (+)pcDNA3.1 توسط برش با انزیم های BamHI و Xhol خارج شده و در وکتور بیانی (+)Pet32a با همین جایگاه های برش در سویه E.coli DH5a کلون گردید. وکتور نوترکیب پس از تایید صحت کلونینگ توسط فرایند های هضم انزیمی، colony PCR و تعیین توالی ژن کلون شده، به میزبان بیانی( DE3(E.coli Rosetta منتقل و القا بیان صورت گرفت.سپس بیان پروتتین با انالیز SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. در نهایت خصلت آنتی ژنیسیته پروتین نوترکیب از طریق وسترن بلات با سرم افراد بیمار تایید گردید. یافته ها: حضور باند پروتینی Taxدر بررسی های مربوط به SDS-PAGE و وسترن تایید شد. وسترن بلات پروتین نوترکیب با سرم افراد بیمار،حضور باند مربوط به پروتین Tax را نشان داد.نتیجه گیری: پروتین به دست امده می تواند به عنوان انتی ژن نوترکیب ویروسی بیان شده و توسط انتی بادی بیماران به درستی شناسایی گردید.